细胞污染预防类
Q1: 实验室细胞房日常消杀需要注意哪些方面？
A1:
1) 个人防护：在进行任何消杀操作之前，酒店保洁13825404095工作人员应当穿戴适当的个人防护装备，包括但不限于实验服、手套、口罩等，以防止微生物感；
2) 定期清洁与消毒：细胞房应该定期进行彻底清洁，并使用合适的消毒剂对工作台面、仪器设备表面、门把手等频繁接触的地方进行消毒；
3) 选择合适的消毒剂：根据需要消灭的微生物类型选择有效的消毒剂。常用的消毒剂有70%异丙醇、次氯酸钠溶液等；
4) 正确使用消毒剂：确保消毒剂覆盖所有表面，并保持一定的时间以确保效果。使用后应适当通风，以避免残留物影响后续实验；
5) 废弃物处理：实验过程中产生的废弃物（如培养基、细胞悬液）必须按照生物安全级别要求进行处理；
6) 防止交叉污染：确保不同种类的细胞或实验之间不会发生交叉污染，可以通过设立不同的操作区域、使用独立的工具和耗材来实现。
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货号
产品名称
abs9372-480ml
培养箱除菌剂
abs9373-480ml
细胞房除菌剂
Q2: 做原代细胞分离有哪些注意事项？
A2:
1) 在做原代细胞的提取时，最好使用单独的原代细胞操作台，整个过程应在无菌条件下进行，以防止细菌或真菌污染；
2) 手术器械准备三套，分别用于皮毛，开腔，剪碎过程；
3) 整个操作中在冰盒上操作，前几代细胞密度高一些，可以带着一些组织进行饲养，培养几天后再加入双抗避免污染；
4) 初次分离的细胞可能需要一段时间来适应体外环境，因此前几天内要密切观察细胞的生长情况。
货号
产品名称
SH30042.01
胰酶
SH30256.01
PBS
SH30529.02
细胞培养级用水
细胞污染辨别类
Q3：血清中的结晶沉淀物是否会对细胞状态有影响？
A3：
1) 血清发生的一些结晶沉淀物，比如说纤维蛋白或者一些磷酸钙的结晶、或者蛋白析出，是比较常见的现象。在显微镜下观察时，可能会看到许多小黑点，这些黑点由于布朗运动可以自由移动，有时会被误认为是微生物污染，但这些沉淀通常不会影响血清的性能，并且在细胞培养方面一般不会对细胞生长产生负面影响；
2) 如果沉淀不多或不影响实验，可以不用去除；
3) 如果血清沉淀比较多，先分装至无菌离心管中，以400g离心5min，配成完培一起过滤。
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货号
产品名称
SH30406.05
New Zealand FBS
SV30208.02
Australian FBS
Q4：我在显微镜下观察细胞时看到有很多小黑点在做布朗运动，是黑胶虫么？
A4：
目前黑胶虫在国际上并没有明确文献指出，我们看到的所谓黑胶虫都是血清中的结晶沉淀物，比如说纤维蛋白或者一些磷酸钙的结晶、或者蛋白析出，一般不会影响细胞的生长。如果细胞生长状态有影响，需考虑是否是其他的污染类型。
Q5：从商业机构购买的细胞检测出支原体，刚开始没有，培养一段时间后就会出现，是什么原因？应该怎么办？
A5:
1) 首先外购的细胞实验前需要再次检测，以防运输或者首次培养的过程引入污染；
2) 其次，支原体阳性细胞所用的所有试剂要排查，尤其血清和胰酶等动物源性产品；
3) 实验用耗材，如枪头，更换成盒装灭菌型或者再次灭菌；如更换试剂耗材后仍反复出现污染，需确认实验环境如操作台、细胞房通风系统是否异常，有无定期清理；
4) 防止细胞间交叉污染；
5) 注意穿戴防护，避免实验中引入，如口腔支原体；
6) 最后，预防支原体污染，需要做好定期检测。
文中部分相关产品：
货号
产品名称
abs9376
支原体预防
abs9588-50T
支原体检测试剂盒（PCR法）
abs9375
支原体清除
Q6：培养箱里托盘中有白色漂浮物，但是细胞培养没有受到影响，是什么原因？
A6：
如果培养箱里有肉眼可见的白色漂浮物，团块状或星点状分布极有可能是出现真菌（如霉菌）污染。细胞没有异常可能是因为培养箱内部分细胞存在污染，其他细胞尚未接触到或者处于污染初期表现不明显。但是真菌是以孢子形式传播，如是真菌污染培养箱内已经存在真菌孢子，需要尽快检查细胞状态，并彻底地清洁和消毒培养箱。水盘中的水也需要定期更换，使用无菌水，保护培养箱环境。在实际操作中，应严格执行无菌操作规范，定期清洁消毒培养设施，以预防污染的发生。
Q7：我的细胞被污染后变浑浊，并且培养基呈粉红色有异味，这是什么污染？
A7：
由于培养基变浑浊，并伴有异味，是典型的细菌污染特征，大多数细菌污染产物呈酸性，因此会出现黄色浑浊，但是部分细菌污染产物也会呈碱性，因此会出现淡粉色的浑浊状态。
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货号
产品名称
SV30010
Penicillin-Streptomycin Solution
abs9246-100ml
青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗)
abs42013298-1g
两性霉素B
Q8：细胞冻存后复苏细胞状态不好，细胞冻存都需要注意什么？
A8：
1. 细胞状态：选择健康、生长旺盛的细胞进行冻存，避免使用已经老化或有污染的细胞；
2. 细胞密度：冻存时细胞密度不宜过低也不易过高，通常建议的密度为1×10^6至1×10^7个活细胞/mL；
3. 保护剂：使用适当的冷冻保护剂，如DMSO或甘油，它们可以减少细胞内冰晶的形成，保护细胞免受损伤；
4. 冻存液：冻存液的配方通常是无血清培养基、血清和DMSO的混合物，比例可以根据细胞类型调整；
5. 冷冻速率：缓慢冷冻是关键，通常使用程序降温盒或逐步降低温度的方法，以避免细胞内形成大的冰晶；
6. 标记和记录：冻存管应明确标记细胞名称、代数、冻存时间等信息，并记录在册；
7. 复苏方法：快速复苏，通常将冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，然后转移到预热的培养基中；复苏后的48小时内尽量减少移动细胞、换液等操作，可以适量补液；
8. 复苏后处理：复苏后，细胞应尽快转移到新的培养基中，并在适宜的培养条件下培养；
9. 避免污染：在整个冻存和复苏过程中，都应采取措施避免细胞污染；
10. 定期检查：定期检查冻存细胞的状态，并在必要时进行复苏后细胞活力的检测。
文中部分相关产品：
货号
产品名称
abs9417-100mL
无血清细胞冻存液（科研级）
abs9479-100mL
无DMSO无血清细胞冻存液
abs9473-100mL
细胞冻存液（含血清）
细胞污染处理类
Q9：使用支原体清除剂后，有什么注意事项？
A9：一般没有特殊要求，因为支原体清除剂本身设计是针对污染的同时保障细胞的活率，在4-5天的清除结束之后，正常换液、传代培养即可，但是需要注意定期检测，防止支原体复发。
Q10：细胞房污染后消杀一般都用哪些方法？
A10：
1）紫外线消毒：尽管紫外线消毒有一定的局限性，但它可以作为日常维护的一部分，用于杀灭空气中的微生物，减少霉菌的滋生。
2）高温消毒：对于耐高温的设备和表面，可以采用高温消毒的方法，通过加热来杀死霉菌。
3）酒精擦拭消毒：对于物体表面，可以使用75%的酒精进行擦拭消毒，但要注意酒精无法杀灭芽孢。
4）甲醛熏蒸：甲醛是一种高效的化学灭菌剂，但因其对人体有害，使用后需要充分通风以排出甲醛。
5）臭氧消毒：臭氧灭菌器可以产生臭氧，对实验室内的空气进行消毒，具有无死角、无残留的优点。
6）彻底清洁实验室环境：包括实验台面、培养箱、无菌操作台等，使用消毒剂进行清洁消毒。
7）定期检测和维护：定期对实验室的微生物污染情况进行监测，发现问题及时采取措施进行处理。
8）控制实验室环境：保持适当的温度和湿度，加强通风，减少霉菌生长的条件。
9）加强人员培训和管理：确保实验室人员了解细胞污染防控知识，遵守操作规范。
支原体污染后有哪些特征？
Q11：PBMC分离刺激后4-5天，出现了长条状的细胞，是什么原因？
1.细胞分化异常的原因之一是支原体，可以做一个支原体检测，确保没有污染出现；2.PBMC分化异常与过度激活有关系，如果确定无污染，同时会观察到细胞凋亡，可以判断是过度激活导致的分化异常，可以调整细胞因子的浓度；3.细胞因子的品牌质量可能会影响激活质量，可以尝试更换品牌。
Q12：细胞状态出现空泡，不贴壁，可能的原因有哪些？
1.细胞污染：在细胞培养过程中，若出现细菌、支原体、黑胶虫等污染，会导致细胞状态明显变差，可能引发细胞产生空泡等异常现象所以首先先排除是否有细胞污染。支原体污染后可能会出现细胞不贴壁，聚团等情况。2.更换细胞使用的培养基或血清可能导致细胞不适应，从而产生空泡。3.传代或换液不及时：细胞长满后未及时传代或细胞长时间未换液，会导致培养过程中细胞代谢副产物的累积和营养物质的耗尽，可能诱导细胞自噬的发生，进而细胞出现空泡化。
Q13：实验室中一个细胞发生了支原体污染，会不会影响同实验室的其他细胞？
会，支原体传播途径包括气溶胶和无机物等，可以通过空气传播，如果细胞房内有一个污染，其他细胞都会处于污染压力之下，需要定期做检测和支原体预防，确定污染后要做支原体清除，甚至实验室的大规模消杀。
细胞生长异常，如不贴壁、聚团、质膜粗糙，同时排除了细菌真菌一类的污染，考虑进行支原体检测；另外，因为支原体的传播途径很广泛，当实验室曾经发生过支原体污染，后续应当加强支原体的检测；新引进的细胞或准备长期保存的细胞，需通过支原体检测后再进行实验或冻存。
支原体应该怎么去除？
Q14：普通的抗生素可以杀灭支原体吗？
普通抗生素抑制细菌细胞壁合成，支原体没有细胞壁结构，普通的抗生素对于支原体是没有抑制作用的。并且支原体耐低温，-20℃可存活一年，冷冻干燥的条件下会存活更久。
Q15：支原体可以通过加热灭活吗？
支原体可以加热杀灭，但高温对细胞有不良影响，热处理前要进行预试验，另外可选用大环内酯、四环素类专门的支原体清除试剂进行去除。
Q16：支原体清除试剂和支原体预防试剂有什么区别？什么时候用？
支原体清除试剂是专门用于杀灭和清除已经污染的细胞培养液中，目的是清除已有的支原体污染，可以抑制支原体蛋白质合成和DNA合成，一般需要处理一段时间。支原体预防试剂，主要用于细胞培养的日常维护中，或者在支原体清除后加入支原体预防试剂防止再次污染。
支原体的去除可以通过热处理（对细胞也有不良影响）、商品化的支原体清除试剂实现，清除完成后，需进行支原体的检测，确保清除完毕。
如何防控支原体？
Q17：细胞间经常出现支原体污染，怎么防控？
1.实验习惯要保持良好，包括个人穿戴、工作台操作、日常卫生；2.采用检测＋监测手段进行预防，新到细胞、重要实验、传代冻存前都要进行检测，每月1-2次常规抽查检测；3.使用支原体预防剂进行添加处理；4.发生误及时使用支原体清除剂处理，并转移其他细胞至安全的地方，直至细胞间完成彻底消杀；5.注意周围实验室的污染情况，避免到污染实验室走动。
Q18：神经元细胞原代分离出现支原体污染，如何防控？
1.原代分离做好个人防护，尤其是口罩：2.使用单独的工作台进行原代分离处理；3.分离过程中使用的洗液和培养基添加双抗和支原体预防剂；4.细胞分离培养后进行支原体检测，如果有污染立即做支原体清除处理。
首先需要保持良好的实验习惯以及个人防护，其次可借助支原体预防试剂进行预防，并常常进行支原体全面检测+抽检进行监测。
细胞培养相关产品
支原体检测
MYCOALERT DETECTION KIT- 10 TESTS LT07-118
支原体检测试剂盒（PCR法） abs9588
支原体去除
MYCOZAP 5 TREATMENT KIT LT07-918
支原体清除试剂 abs9253
支原体防控
MycoZap™ Prophylactic (10 x 1 ml) VZA-2031
支原体预防剂 abs9376
进口优品血清
New Zealand FBS SH30406.05
Australian FBS SV30208.02
细胞培养基
RPMI 1640, 1X, with 2.05 mM L-Glutamine SH30027.01
DMEM with High Glucose, with 4.0 mM L-Glutamine, with Sodium Pyruvate SH30243.01
DMEM/F12 1:1, with 2.50 mM L-Glutamine, 15 mM HEPES SH30023.01
抗生素
Penicillin-Streptomycin Solution SV30010
胰酶
Trypsin, 0.25% (1X) with porcine trypsin and EDTA SH30042.01
Cytiva & HyClone
HyClone™品牌创立于1967年，是细胞培养和相关产品的全球供应商，并为生物制药的研发与生产提供支持。2014年HyClone™品牌正式并入Cytiva。近50年来，HyClone™一直是高品质胎牛血清及其他细胞培养产品行业的先行者，提供高质量的胎牛血清 (FBS)、缓冲液、培养基、微载体等细胞培养产品和服务。
HyClone：可靠的细胞培养专家
1. HyClone高品质胎牛血清，国内现货稳定供应
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2. 细胞培养基：化学成分确定的、不含动物成分的、经典的多种细胞培养基可供选择
3. 盐溶液和水制品：包括细胞培养及分子生物级用水，以及PBS/DPBS/HBSS/EBSS等
4. 其他成分：胰酶、双抗、营养添加剂（谷氨酰胺、丙酮酸钠等）及非营养添加剂（HEPES、消泡剂等）
